基于薄荷油为油相的红花提取物自微乳凝胶递送系统制备研究

目的制备以薄荷油(Menthaha plocalyx oil,MPO)为油相的红花提取物(Carthamus tinctorius extract,CTE)自微乳凝胶递送系统(CTE-SMEDDS-BGs)。方法以MPO为油相,CTE为水相,采用伪三元相图法优选载药自微乳处方,采用单因素法筛选凝胶工艺与处方,并对其外观性状、黏度和pH值进行评价。结果所得CTE-SMEDDS-BGs最佳处方工艺:F68为乳化剂,无水乙醇为助乳化剂,乳化剂与助乳化剂比例(Km)为1∶1,乳化剂和助乳化剂总量(TS)与MPO的比例为8∶2,卡波姆2%,甘油6%,CTE5m L。处方量自微乳加入溶胀后的凝胶基质,三乙胺调节pH值至6.0即得CTE-SMEDDS-BGs;其外观为黄色半透明、黏稠度适中、均匀细腻、不油腻,易涂展的胶状凝胶,黏度为4.98×10~4m Pa·s(RSD为1.53%),pH为6.04(RSD为0.44%)。结论制得的薄荷油为油相的CTE-SMEDDS-BGs,制备简便,方法稳定,符合凝胶局部外用制剂要求。     

桃红四物汤对慢性盆腔炎患者炎性应激及局部微循环状态的影响

目的:观察桃红四物汤对慢性盆腔炎患者炎性应激及局部微循环状态的影响。方法:将2014年5月—2015年2月本院收治的56例慢性盆腔炎患者随机分为对照组和观察组,每组各28例。对照组给予常规西医治疗,观察组给予桃红四物汤治疗。检测两组患者治疗前后细胞因子和血清炎性应激指标水平变化情况。结果:对照组治疗后2周及治疗后4周细胞因子指标和血清炎性应激指标改善情况均优于治疗前,观察组治疗后各期细胞因子和血清炎性应激指标改善情况均优于治疗前,差异均有统计学意义(P0.05);观察组治疗后各指标均优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后观察组局部微循环指标优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:桃红四物汤可显著改善慢性盆腔炎患者炎性应激水平及局部微循环状态。     

西红花与红花的抗血栓作用研究

目的比较西红花Crocus sativus水提物与红花Carthamus tinctorius水提物及其主要活性成分的抗血栓作用。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、西红花酸(50 mg/kg)组、羟基红花黄色素A(50 mg/kg)组、西红花水提物(200 mg/kg)组、红花水提物(700 mg/kg)组和阿司匹林(50 mg/kg)组,大鼠sc肾上腺素建立急性血瘀模型。造模前给予药物干预7 d,观察各组大鼠凝血时间、凝血酶原片段1+2(prothrombin fragment 1+2,F1+2)、凝血酶抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,TAT)、蛋白S(protein S,PS)、血流变相关指标、血生化相关指标、纤溶系统相关指标以及右颈动脉病理的变化情况。结果与模型组比较,各给药组凝血时间显著升高(P0.05),血清中F1+2和PS水平显著降低(P0.05、0.01);除红花水提物组,其余各给药组血清中TAT水平显著降低(P0.05);西红花酸组和羟基红花黄色素A组150 s~(-1)切边率的全血黏度和红细胞压积显著降低(P0.05);西红花酸组、羟基红花黄色素A组和西红花水提物组60 s~(-1)切边率的全血黏度显著降低(P0.05、0.01);西红花酸组、羟基红花黄色素A组和红花水提物组10 s~(-1)切边率的全血黏度显著降低(P0.05、0.01);各给药组红细胞聚集指数显著降低(P0.05);各给药组大鼠血清中三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平显著降低(P0.05);西红花酸组和羟基红花黄色素A组血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性显著降低(P0.05),西红花酸组、西红花水提物组和红花水提物组血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性显著降低(P0.05);各给药组血清中纤溶酶激活物抑制物(plasminogen activator inhibitor,PAI)和D-二聚体(D-dimer)水平显著降低(P0.05、0.01),西红花酸组和西红花水提物组血清中6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)水平显著升高(P0.05);各给药组大鼠血管内皮脱落减少。结论西红花酸的抗血栓作用优于羟基红花黄色素A,西红花水提物的抗血栓作用优于红花水提物。     

红花2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶基因的克隆及表达分析

目的克隆红花维生素E合成相关关键酶2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶(MPBQ MT)基因,并进行生物信息学及表达分析,为红花维生素E生物合成及调控机制研究奠定基础。方法根据红花种子转录组数据库中得到的中间序列,采用RT-PCR和RACE方法从红花种子中克隆MPBQ MT基因序列,通过生物信息学对该基因蛋白的特征进行分析,构建MPBQ MT与相关物种MPBQ MT的系统进化树,利用RT-PCR方法分析在红花种子不同发育时期MPBQ MT基因的表达量。结果MPBQ MT基因全长1 392 bp,命名为Ct MPBQ MT,具有完整的开放阅读框(ORF),共1 038 bp,编码345个氨基酸。生物信息学分析显示,该基因编码的蛋白理论相对分子质量约为38 900。保守结构域预测表明,该基因编码的蛋白具有典型的SAM蛋白功能结构域。结合其他物种的MPBQ MT基因构建系统树表明,红花MPBQ MT基因与其他物种氨基酸具有一定的同源性,其中与向日葵和生菜同源性高达89%和86%。实时荧光定量PCR分析表明,MPBQ MT基因在红花开花后50 d的种子中表达量最高。结论成功地对MPBQ MT基因进行克隆及表达分析,为红花维生素E合成及调控机制研究奠定基础。     

红花转录因子CtMYB1基因的克隆及原核表达

目的 从红花Carthamus tinctorius 花瓣中克隆转录因子基因CtMYB1,并进行序列分析和原核表达载体的构建。方法 根据红花转录组测序结果中得到的高表达的Unigene123933序列,利用RT-PCR和RACE技术从红花花瓣中扩增得到CtMYB1基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析;以CtMYB1基因的全长cDNA序列为模板,PCR扩增得到CtMYB1基因的开放阅读框(ORF)序列,构建原核表达载体pEASY-E1-CtMYB1。转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。结果 成功从红花中克隆1个MYB基因,命名为CtMYB1,GenBank登录号为KJ524853。CtMYB1基因全长893 bp,ORF为750 bp,编码249个氨基酸。同时,成功构建了该基因的原核表达载体。SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约30 000,与预测的蛋白相对分子质量一致。结论 成功克隆了CtMYB1基因,构建了原核表达载体,初步证明该基因在大肠杆菌中成功表达。     

红花黄酮醇合酶基因的全长cDNA克隆及植物表达载体的构建

黄酮醇合酶(flavonol synthase,FLS)是黄酮化合物代谢途径中的关键酶之一。本文在红花转录组测序结果中获得中间序列的基础上,采用RT-PCR和RACE技术,从我国传统中药材红花花瓣中克隆到黄酮醇合酶基因的全长c DNA。该基因全长1 201 bp,开放阅读框1 011 bp,编码336个氨基酸。系统进化分析表明,红花FLS基因编码氨基酸与同属菊科植物氨基酸具有一定的同源性,其中与金光菊的亲缘关系最近。通过分子生物学方法,成功构建p BASTA-FLS植物表达载体。为后续研究该基因的生物功能及黄酮化合物合成机制奠定了基础。     

慢性低氧高二氧化碳大鼠大脑超微结构改变和SOD、MDA、XOD变化及红花的保护作用

目的:探讨慢性低氧高二氧化碳大鼠大脑超微结构、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醇(MDA)与黄嘌呤氧化酶(XOD)含量的变化,及红花注射液的保护作用。方法:采用慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压模型,应用红花注射液治疗,电镜观察大鼠脑超微结构并测定其SOD、MDA、XOD含量。结果:慢性低氧高二氧化碳使大鼠大脑神经元和神经胶质细胞水肿,伴有细胞内线粒体、内质网、高尔基体等细胞器的变化,并使SOD含量降低,MDA、XOD含量升高。结论:红花注射液对慢性低氧高二氧化碳大鼠大脑神经细胞结构损害有保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关。     

Carthamus tinctorius L. extract activates insulin‐like growth factor‐I receptor signaling to inhibit FAS‐death receptor pathway and suppress lipopolysaccharides‐induced H9c2 cardiomyoblast cell apoptosis

Carthamus tinctorius L. (Compositae) is used in Chinese medicine to treat heart disease and inflammation. In our previous study, we found that C. tinctorius L. inhibited lipopolysaccharides (LPS)‐induced tumor necrosis factor‐alpha (TNF‐α) activation, JNK expression, and apoptosis in H9c2 cardiomyoblast cells. The present study was performed to investigate the protective effect of C. tinctorius extract (CTF) on LPS‐challenged H9c2 myocardioblast cell and to explore the possible underlying mechanism. Cell viability assay showed that LPS treatment decreased the cell viability of H9c2 cell, whereas CTF treatment reversed LPS cytotoxicity in a dose‐dependent manner, especially in the LPS + CTF 25 (μg/mL) group. LPS treatment‐induced apoptosis was determined by transferase‐mediated dUTP nick end labeling assay, and by Western blot. LPS‐induced apoptotic bodies were decreased following CTF treatment. Expression of TNF‐α, FAS‐L, FAS, FADD, caspase‐8, BID, and t‐BID was significantly increased in LPS‐treated H9c2 cells. In contrast, it was significantly suppressed by the administration of CTF extract. In addition, CTF treatment activates antiapoptotic proteins, Bcl‐2 and p‐Bad, and downregulates Bax, cytochrome‐c, caspase‐9, caspase‐3, and apoptosis‐inducing factor expression. Furthermore, CTF exerted cytoprotective effects by activating insulin‐like growth factor‐I (IGF‐I) signaling pathway leading to downregulation of the apoptotic proteins involved in FAS death receptor pathway. In addition, AG1024 and IGF‐I receptor (IGF‐IR) inhibitor and siRNA silencing reverses the effect of CTF implying that CTF functions through the IGF‐IR pathway to inhibit LPS‐induced H9c2 apoptosis. These results suggest that treatment with CTF extract prevented the LPS‐induced apoptotic response through IGF‐I pathway.     

红花-甘草配伍对寒凝血瘀模型大鼠血浆及脑组织中腺苷酸及能荷的影响

目的：研究红花-甘草配伍对寒凝血瘀模型大鼠血浆及脑组织中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）及能荷（EC）水平的影响,从能量代谢角度探讨该配伍对寒凝血瘀证的影响。方法：采用冷水冰浴方法成功建立寒凝血瘀证SD大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为4组,即模型对照组、红花组、甘草组、红花-甘草组,另设正常对照组。造模成功后,给药组灌胃相应的药物,剂量为20 g·kg^-1,模型对照组和正常对照组给予等容积的纯净水,各组均连续灌胃15 d,检测大鼠血浆及脑组织中3种腺苷酸的含量并计算能荷值。结果：与正常对照组相比,模型对照组ATP、ADP的含量及EC值均显著降低（P<0.01）,AMP的含量降低不明显。与模型对照组相比,各给药组ATP、ADP的含量及EC值均显著升高,红花-甘草组改善上述指标的作用强于单药组,差异有显著性（P<0.05）。结论：红花和甘草均可改善寒凝血瘀模型大鼠的能量代谢,促进机体对能量物质的利用,红花-甘草配伍对改善寒凝血瘀证能量代谢显示出更佳的疗效。     

基于活血化瘀理论的中药配伍防治脑缺血再灌注损伤炎症反应的作用机制

[目的]以丹红注射液为例,研究活血化瘀中药防治脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)炎症反应的作用机制。[方法]通过对以往研究文献的整理复习,从CIRI与炎症反应的相关性及瘀血证与炎症反应的相关性出发,重点分析以丹红注射液为代表的活血化瘀中药防治CIRI炎症反应的作用机制。[结果]炎症反应在CIRI的病理生理过程中起到重要作用,基于中医活血化瘀理论的瘀血证与炎症反应的关系密不可分。瘀血证的病理实质包括了多种致炎细胞因子造成组织器官水肿、血栓形成及相关炎症通路激活等一系列的病理变化,而活血化瘀疗法可以从不同方面通过不同途径调节CIRI过程中的炎症反应,如活血化瘀的代表药物丹红注射液能抑制CIRI中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-10的分泌,从而减轻炎症反应,有利于缓解脑组织损伤,防止病情进展,改善患者预后。[结论]对活血化瘀中药防治CIRI炎症反应的作用机制进行探讨,可以为临床防治CIRI的新药开发提供理论基础。